根据2002年版《消毒技术规范》的要求，现将我院消毒灭菌效果监测、环境微生学监测的采样方法、结果判定、质控标准等规范如下：

 环境卫生学监测：包括空气、物体表面、医务人员手的监测
    采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不得﹥24小时。

医院室内空气的消毒

I 类环境：包括层流洁净手术室和层流洁净病房，要求空气中的细菌总数≤10 cfu/m³。

II 类环境：包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房。要求空气中的细菌总数≤200 cfu/m³。

     III类环境：包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病室和房间，要求空气中的细菌总数≤500 cfu/m³。

    1、  采样时间：消毒处理后，操作前进行采样。
     2、采样方法：平板暴露法
   （1）布点方法：室内面积≤30 m²;，设内、中、外对角线3点，内外两点距墙1米；室内面积＞30 m²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。
   （2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板放在室内各采样点处，采样高度为距地面1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖好立即送检。
    3、计算公式：
    空气细菌菌落总数（cfu/ m³）=50000N∕（A × T）
    式中A为平板面积（cm²）；T为平板暴露时间（min）；N为平均菌落数（cfu）。平板面积：半径²× π （π即3.14） 那么此公式可以简化为N×157。
    4、注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。
    5、质控标准（结果判定）：
    Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu∕m³ (或0.2cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；
    Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu∕m³ (或4cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；
    Ⅲ类区域：细菌总数≤500cfu∕m³ (或10cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。

物体和环境表面消毒

I 类环境：包括层流洁净手术室和层流洁净病房。

II 类环境：包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房。

I、II类环境要求物体表面的细菌总数≤5 cfu/cm²。

III类环境：包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病室和房间，要求空气中的细菌总数≤10 cfu/cm²。

IV类环境：包括传染病科及病房。要求物体表面细菌总数≤15 cfu/cm²。

1、采样时间:在消毒处理后进行采样。（或是在灭菌处理后，存放有效期内采样）                   
    2、采样面积：被采表面＜100/ cm²，取全部表面；被采表面>100 cm²，取100 cm²。小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。
    3、采样方法：

①   压印采样法：采用一直径为5.6 cm（面积约为25 cm²）的消毒塑料专用平皿，倾注营养琼脂培养基，并使培养基高出平皿边缘1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采样时将平皿上的琼脂表面直接压贴在被检物体表面10-20秒后送检。
置37℃培养箱培养24-48小时，计算并鉴定细菌。

②用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积>100 cm²，连续采样4个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子投入10 ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。
    4、采样结果计算方法：
 
   物体表面细菌       平皿上菌落平均数 ×采样液稀释倍数
   菌落总数(cfu/cm²)＝─────────────────
                                 采样面积(cm²)

采样液稀释倍数为10：（棉拭子投入10 ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内）
    5、质控标准：

Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤5cfu∕cm²，并未检出致病菌为消毒合格。
    Ⅲ类区域细菌：总数≤10cfu∕cm²，并未检出致病菌为消毒合格。
    Ⅳ类区域细菌：总数≤15cfu∕cm²，并未检出致病菌为消毒合格。
    母婴同室、早产儿室、婴儿室、 新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。
   

手和皮肤黏膜消毒：

1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。
    2、采样面积及方法：

（1）手的采样:被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30 cm²)，并转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

（2）皮肤粘膜采样：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。若表面不足5cm×5cm，可用相应面积的规格板采样。
    3、检测方法：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。
    4、采样结果计算方法：
                                       平板上菌落的平均数 ×采样液 稀释倍数
      细菌总数(cfu/ cm²) ＝ ─────────────────────────
                                  采样面积(cm²)

其中采样面积即为30×2。
5、质控标准：

Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu∕cm²，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为消毒合格。
    Ⅲ类区域工作人员：细菌总数≤10cfu∕cm²，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。
    Ⅳ类区域工作人员：细菌总数≤15cfu∕cm²，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。
    母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门氏菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。

 皮肤粘膜：参照手的卫生学标准执行。

医疗用品卫生标准：

1、             进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。

2、             接触粘膜的医疗用品，细菌菌落总数应≤20cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得检出。

3、             接触皮肤的医疗用品，细菌菌落总数应≤200cfu∕g或100 cm²，致病性微生物不得检出。

使用中消毒剂与无菌器械保存液卫生标准：

1、          使用中消毒剂：细菌菌落总数应≤100cfu∕ml，致病性微生物不得检出。

2、          无菌器械保存液：必须无菌。